下载掌阅APP，畅读海量书库
立即打开
限制性内切片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）分析是一种基于PCR扩增和限制性内切酶特异识别序列并切割的基因分型法。该法不依赖自动化设备，是实验室对较少量的标本进行基因分型的实用方法。限制性内切酶通常可以特异性识别双链DNA的某一段序列，并在特定位置或附近进行DNA双链切割，进而产生短的DNA片段。而由于限制性内切酶识别序列的严格性，识别序列发生一个碱基的变化都使得酶切位点不能被酶切，从而保持原有序列长度。
RFLP法用于基因分型时，限制性内切酶的识别序列选择主要依据SNP位点上的已知等位基因，根据待测的SNP等位基因和位点附近序列，查找符合序列的限制性内切酶。设计引物扩增含有SNP位点的DNA片段。当限制性酶与PCR产物共同孵育时，该酶将仅识别一个等位基因（野生型或变异型），然后在该位点切割DNA分子。依据个体携带的等位基因不同，酶切可以产生不同的切割片段，应用凝胶电泳，通过DNA片段大小判断SNP基因型。
RFLP基因分型法不需要探针标记，也不需要特别的仪器设备等，只需要找到特异性限制性内切酶，所以检测成本低，实验操作简单，常规实验室即可完成。但是该法包括PCR、酶切、电泳步骤，耗费人力多、时间长，难以实现高通量基因分型，只适合小规模的基因分型。而且，并非所有SNP位点均能找到合适的限制性内切酶，所以该法不能适用于所有SNP位点分型。