第五节
方法学应用与评价

DFA法采用FITC荧光素标记抗体，多采用多价抗梅毒螺旋体抗体、抗梅毒螺旋体单克隆抗体或抗梅毒螺旋体组分抗体，且上述抗体均通过非特异性梅毒螺旋体吸收以除掉交叉反应物质，因此DFA法特异性高。由于DFA法原理为特异性抗原抗体反应，不需要活的梅毒螺旋体，可用于检测体液（皮损组织液、穿刺液、羊水、CSF等）和组织样本，其优点是可区分梅毒螺旋体与其他条件致病性螺旋体，对口腔、肛周、直肠等非生殖器部位的损害有鉴别价值。

在免疫荧光技术检测梅毒螺旋体方法学的研究中，一些学者使用pH 7.2 PBS洗液和封固剂，一些学者使用改良pH 9.0碳酸盐缓冲液。与pH 7.2PBS比较，Elsas发现pH9.0缓冲液可大大抑制荧光的强度。Earl和Edwards对样本固定时间对结果的影响研究证实，在不同的温度下，样本片制备后3～5天固定对梅毒螺旋体荧光的强度无明显的影响；进一步用DFA法对13例临床样本进行比较，显示与暗视野法的符合率为100%。作者认为免疫荧光法克服了暗视野法必须依赖于及时样本检测的缺陷，可将固定或不固定样本片运输到实验室进行检测，因此优于暗视野法。然而，由于该法需要荧光显微镜，作为小型实验室梅毒常规检测方法有一定限制。

关于梅毒螺旋体直接免疫荧光法检测的敏感性与特异性，Jue等采用多克隆抗体检测敏感性为90%，特异性为96%；Daniels和Ferneyhough的研究得出其检测的敏感性为86%，特异性为97%。美国CDC采用单克隆抗体检测的敏感性和特异性均高达100%；而Romanowski等报道敏感性为73%，特异性为100%，比较暗视野法敏感性（79%），DFA法显示较高的特异性和敏感性。Cummings等比较188例生殖器溃疡的病例，其中64例（34%）患者经暗视野显微镜检测或直接免疫荧光法阳性，或两种同时阳性证实为早期梅毒。其中，直接免疫荧光法的敏感性为92.2%，而暗视野法敏感性为85.9%。直接免疫荧光法的敏感性稍高于暗视野检查法。Edwar等比较发现直接免疫荧光法的敏感性100%（30/30），而暗视野法为96.7%（29/30）。Hitendras报道DFA法和PCR法在一期梅毒硬下疳样本均具有高度敏感性，符合率达95.5%。

直接免疫荧光法检测梅毒螺旋体阴性结果时，不能完全排除梅毒。该方法除样本采集的量、试剂质量和操作技术等因素可导致假阴性外，硬下疳溃疡的进展阶段及药物治疗等临床因素同样可影响检验结果。

直接免疫荧光法可作为梅毒诊断的确证试验，若发现梅毒螺旋体结合病史，即可确诊为梅毒感染。该法具有较高的敏感性和特异性，适合于中高级实验室开展。

（黄进梅　黄澍杰） nGmA5aa2cNwnmL/0tcrBTrHcBWMi9OVAhmFKl55FvR6ZaDbUIZiIErgDhGNkj+sr