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显微镜各项性能要保持良好，尤其是汞灯在要求寿命内使用，以确保紫外光的强度。可选用商品化的FITC质控片进行显微镜荧光强度的标化。
每年至少应该标定1次，由专业机构人员进行校正并记录，日常工作中发现异常情况应随时进行校准。
刮取溃疡渗出液10μl，均匀地涂布于洁净的荧光检测专用玻片上，空气干燥15分钟。多克隆抗体检测用片，用丙酮固定10分钟后空气干燥，保存于-20℃，避免反复冻融。单克隆抗体检测用片，直接保存于-20℃，临用前，滴加1至2滴100%甲醇，用吸水纸吸干并空气干燥后使用。
仔细切取一小块睾丸的感染部位或坏死组织，将组织块在玻片上滚动，确保含有螺旋体的组织印迹在玻片上，空气干燥15分钟。单克隆抗体检测用片，直接保存于-20℃，避免反复冻融。临用前，滴加1至2滴100%甲醇，用吸水纸吸干并空气干燥后使用。
根据试剂盒说明加入复溶液，振荡器振荡10秒充分混匀螺旋体悬液，经暗视野显微镜检查菌液浓度是否适宜，用接种环取菌悬液，均匀涂布于洁净的荧光检测专用玻片上，涂布成1cm大小圆圈，空气干燥15分钟。多克隆抗体检测用片，用丙酮固定10分钟后空气干燥，保存于-20℃，避免反复冻融。单克隆抗体检测用片，直接保存于-20℃，临用前，滴加1至2滴100%甲醇，用吸水纸吸干并空气干燥后使用。
非致病螺旋体Reiter株、齿垢螺旋体培养物涂片。制备方法同上。
（1）用pH7.2含2% Tween-80的PBS制备系列2倍稀释的FITC标记抗梅毒螺旋体抗体液。
（2）用每一稀释度抗体分别检测梅毒螺旋体片，同时检测Reiter株片以观察有无非特异性反应。
（3）工作液的稀释度选择低于显示最强荧光强度的最高稀释度的2个稀释度，同时该稀释度再稀释2个稀释度后与Reiter株无交叉反应。
用梅毒螺旋体质控片，染色后显示3+或4+的荧光强度，与梅毒螺旋体显示特异性结合，而低于工作液两个稀释度时与Reiter株无交叉反应。
pH检测甘油封固剂应符合要求，且无自发荧光。
1.将阴性与阳性质控样本自冰箱取出并恢复至室温。
2.每一批样本检测时应加入阴性阳性对照，严格按照标准操作在相同条件下平行检测。
3.阳性质控片结果显示典型的绿色荧光螺旋体，荧光强度（3+或4+）与标定值基本一致，其差异不得超过±1个强度等级；阴性质控片未见绿色荧光的螺旋体。
4.阴性、阳性质控片结果正确后，检测临床样本。
5.记录实验原始登记表，包括实验日期、试剂及批号、实验样本、阳性对照、阴性对照、操作者等。