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目镜10×；物镜10×和40×；FITC过滤片BG12或KP490。
35～37℃。
含有玻片架的湿盒。
10～100μl。
1×3英寸长，1mm厚度，一端磨砂。
细菌铂金接种环，直径2mm。
皮肤真菌取材钝刀、盖玻片。
（1）FITC标记人抗梅毒螺旋体多克隆抗体：
抗梅毒螺旋体抗体阳性的血清，用非致病性螺旋体，如溃蚀齿密螺旋体（ T.phagedenis ），螺旋体Reiter株等，吸收非特异性抗体后，将特异性球蛋白分离并标记FITC荧光素。该抗体仅与梅毒螺旋体发生特异性结合。商品化试剂常以冷冻干燥的方式保存，试验前要按照试剂盒推荐的方法进行复溶。溶解后如呈云雾状，可采用500g×10分钟离心，收集上清液使用。根据试剂盒推荐的工作液浓度，用2%Tween-80 PBS缓冲液稀释。
（2）FITC标记鼠抗梅毒螺旋体单克隆抗体：
荧光标记鼠抗梅毒螺旋体单克隆抗体球蛋白，为特异性梅毒螺旋体苍白亚种抗体，与非致病性螺旋体或可培养的螺旋体如齿垢密螺旋体（ T.denticola ）等无交叉反应。商品化试剂常以冷冻干燥的方式保存，试验前要按照试剂盒推荐的方法进行复溶。溶解后如呈云雾状，可采用500g×10分钟离心，收集上清液使用。根据试剂盒推荐的工作液浓度，用2%Tween-80 PBS缓冲液稀释。
（3）阳性对照片：
已知的梅毒硬下疳渗出液制备的阳性涂片，或经兔睾丸感染培养后的组织印片，或商品化梅毒螺旋体悬液提供。
（4）阴性对照片：
非致病螺旋体Reiter株、齿垢螺旋体培养物涂片。制备方法同上。
（5）其他试剂：
丙酮（试剂级）；甲醇（试剂级）；pH 7.2，2.0%Tween-80 PBS，含或不含1∶20 000伊文思蓝；封固剂（1份pH 7.2 PBS加入9份甘油的混合液）；伊文斯蓝（Evens blue）储存液（0.5% PBS伊文思蓝），伊文思蓝工作液（1∶100稀释伊文思蓝储存液成0.005%溶液）。
1.设置标记阴性、阳性及实验样本片，置于孵育盒的玻片架上。
2.加入30μl荧光素标记的抗梅毒螺旋体单克隆抗体，覆盖涂片的样本膜，密闭孵育盒后置恒温箱37℃反应30分钟。
3.用pH7.2缓冲液涤3次，自然干燥或吸水纸吸水后，滴加缓冲甘油封片剂，加盖玻片。
4.荧光显微镜镜检 用荧光显微镜观察实验与对照片。首先在可见光下，用10×物镜扫描涂片，40×油镜辨认涂片均匀的区域，再改换荧光，用40×物镜扫描查找发绿色荧光的螺旋体，再换用100×油镜下进行确证。
特异性荧光强度判断标准：一般可用“+”表示：（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++--++++）荧光闪亮。
如果阴阳性对照片结果符合要求，检查实验样本片。当发现显示2+或以上阳性绿色荧光典型螺旋体时，报告直接免疫荧光法可见梅毒螺旋体（图7-1）；如未发现螺旋体，则报告直接免疫荧光法未见梅毒螺旋体。
图7-1 梅毒螺旋体
直接免疫荧光法可作为梅毒诊断的确证试验，若发现梅毒螺旋体结合病史，即可确诊为梅毒。DFA法敏感性和特异性均高于暗视野检查法，极早期未治疗的梅毒，该试验常表现为阳性，而血清学检测可能为阴性。
阴性结果不能完全排除梅毒感染，因出现溃疡的时间、样本量、试剂质量、操作技术等可导致假阴性。怀疑梅毒时，除生殖器部位溃疡外，其他部位无痛性有硬结的小溃疡、局部淋巴结病也应考虑为梅毒性的溃疡，可取材进行DFA检查。
1.试剂按要求在2～8℃冰箱存放，在有效期内使用。
2.不同批号试剂（荧光抗体）不能混用。
3.实验时，荧光标记的球蛋白抗体的非特异性反应沉积，可能混淆与梅毒螺旋体的鉴别而产生假阳性结果，故冲洗要充分。
4.冲洗时，避免阳性对照片中的螺旋体对样本片的污染而导致的假阳性结果。
5.采样时患者是否进行过治疗、溃疡进展的阶段、采集样本质与量等均可影响检测的阳性率。
6.FITC抗梅毒螺旋体抗体不能鉴别梅毒螺旋体与雅司螺旋体。
7.玻片应选择洁净的荧光染色专用玻片。