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暗视野聚光器分为湿式和干式两种，湿式使用时需在暗视野聚光器顶部加水，干式不用加水。在检查患者样本之前首先进行暗视野显微镜的调校并确保显微镜处于良好的工作状态。采用油浸物镜检查质控玻片，质控样本必须观察到溃蚀齿螺旋体形态和运动性（表5-1）。
崭新洁净，无刮痕，厚度为1.0～1.2mm。
崭新洁净，无刮痕。
溃蚀齿密螺旋体（ T.phagedenis ）悬液或牙龈刮取物制备的齿垢螺旋体盐水悬液。
暗视野显微镜必须在样本收集检查前做好调校，以保证处于满意的工作状态。用质控片调校好的暗视野显微镜观察，可见相应螺旋体的形态和运动性与溃蚀齿密螺旋体所述特性一致。
1.放置一张空白载玻片在载物台上，调节暗视野聚光器接近载玻片。
2.打开光源并将光线调至最亮。
3.降低暗视野聚光器，在湿式聚光器顶部滴上2～3滴水，干式聚光器不需要滴加水。
4.换上质控片使样本位置移至聚光器部位。
5.缓慢升高聚光器直到水完全接触载玻片底部；干式聚光器调整至光线最强。
6.旋转物镜转换器，将10×物镜至样本上方。
7.调节粗调螺旋使样本聚焦。
8.调节固定聚光器的两个螺旋使光线集中于视野中央。
9.通过轻微的上下移动暗视野聚光器直到观察到最小最强的圆形光斑（图5-6）。
图5-6 暗视野聚光器的中心调节及调焦
A．聚光器光轴与显微镜光轴不一致时情况；B．调节后，聚光器焦点与被检标本不一致时情况；C．调焦后，聚光器焦点与被检标本一致时的情况
10.旋转物镜转换器换成40×高倍物镜。
11.调节聚焦微螺旋使样本聚焦。
12.如果观察到一个满意的影像，加一滴香柏油在盖玻片上。如使用不加油100x物镜，则不用滴加香柏油。
13.旋转物镜转换器使100×暗视野专用物镜与盖玻片上的油充分接触，调节物镜孔径光栅获得暗视野最佳图像。
14.调节聚焦微螺旋以获得更好的影像，通过调节光源强度获得最佳对比度。
1.根据参考文献结合本实验室实际情况，撰写本实验室的暗视野检查标准操作程序（SOP），严格按照SOP操作。
2.人员培训 科室主任应指定已掌握暗视野检查的资深技术人员对新从事该项工作的技术人员进行上岗前培训和考核，并在该技术人员掌握了对暗视野显微镜的使用、质控片的观察和临床样本观察后，确认可以独立报告暗视野检查结果和结果解释后，方可给予独立开展该项检查的资格。在日常检测工作中，如观察到可疑梅毒螺旋体，应请经验丰富人员复核。
3.设备维护 每次检测工作日结束时，应使用清洁剂和擦镜纸仔细擦去镜头、载物台等处油渍，确保镜头光亮无油渍，并确保暗视野显微镜的清洁和防潮防尘。
4.一期梅毒暗视野检查阳性率 可定期统计一期梅毒的暗视野检查阳性率，如果检出率很低（国内外文献报道基本在50%阳性率以上）或没有检出阳性，则应对技术人员、暗视野显微镜和样本采取等环节进行质量评估，以排除因设备或人为因素导致的假阴性。