第一节

实验室检查

实验室检查是评估内分泌腺功能的重要手段，包括血尿生化指标测定、激素及其代谢产物测定、激素分泌动态试验等。

一、血液及尿液生化测定

某些激素与血清电解质和其他物质之间（如醛固酮与血清钠、钾；甲状旁腺素与钙、磷、镁；胰岛素和胰高血糖素与血糖）有相互调节作用，测定血液、尿液及组织中受激素调节或影响的物质浓度，可间接了解相关激素分泌的情况，并依此推断分泌该激素的内分泌腺的功能状态。

在普食的情况下，原发性醛固酮增多症（原醛）患者的血清钾水平常低于正常水平，每日尿钾排泄量反升高；库欣综合征患者的血钾水平也低，但血钾降低和每日尿钾排出量增加不如原醛患者明显；相反，原发性肾上腺皮质功能减退症（Addison病）患者的血钾水平高、尿钾则降低。影响血中钠钾变化的内分泌疾病还有继发性醛固酮增多症、肾素瘤、糖尿病酮症酸中毒、高渗性非酮性昏迷等。

原发和继发性甲状旁腺功能亢进可引起血钙浓度升高，常伴有血磷浓度降低；甲状旁腺功能减退（包括假性甲旁减）则有与前述相反的变化。这是由于机体内血钙与血磷之间保持一定的浓度比，其中之一发生浓度变化可影响另一指标值。

二、激素及其代谢产物实验室测定方法

内分泌疾病诊断的首要步骤是确定内分泌的功能状态，检测体内激素水平的高低，是判断内分泌功能状态的一项重要手段。但血液、组织液中，类固醇激素、甲状腺激素、肽类激素的浓度水平低，多在μmol/L至pmol/L水平，用一般的生物法和化学比色法很难检测到。自20世纪50年代末，放射免疫法用于测定肽类激素以来，激素检测技术不断发展，使测定血浆及组织中低浓度的激素成为可能，并显著地提高了测定的特异性和灵敏性。免疫法是目前临床激素常规检测的主要方法。

（一）放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）

RIA是将同位素分析的灵敏性和抗原-抗体反应的特异性的两大特点结合起来的一种微量测定技术。其原理是标记抗原与其特异抗体反应，产生标记抗原-抗体复合物，反应物与产物保持着可逆的动态平衡。RIA方法广泛应用于内分泌的各种激素，包括蛋白质、多肽和类固醇激素的测定。

（二）酶联免疫吸附分析法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）

ELISA是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种免疫测定技术。其基本原理是使用两种抗体，一种作固定抗体，另一种作酶标抗体，被测抗原可同时与两种抗体结合，夹在两种抗体之间，这种双位点夹心原理明显提高了检测的特异性和灵敏度，目前被广泛应用。

（三）免疫放射分析法（immunoradiometric assay，IRMA）

IRMA是从放射免疫分析（RIA）的基础上发展起来的核素标记免疫测定，这种方法特异性好、灵敏度高、快速、简便，但不适于小分子肽类激素和类固醇激素。

（四）化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）

CLIA是具有高灵敏度的化学发光分析和高特异性的免疫反应相结合的一种新型超微量分析技术，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术，是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

（五）电化学发光免疫分析（electrochemiluminescenceimmunoassay，ECLIA）

ECLIA是电化学发光和免疫测定相结合的微量物质分析技术，能对各种物质进行快速分析，是目前最先进的标记免疫测定技术。该方法检测灵敏度高，可检测到浓度小于1pmol/L的超微量物质，线性范围广，可达6个数量级，反应时间短，是其他免疫分析技术无法比拟的。

（六）时间分辨荧光分析法（time resolved fluoroisnmuno assay，TRFIA）

TRFIA是非同位素免疫的微量分析技术，其灵敏度高达10～17mmol/ml，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。由于其灵敏度高，操作方法简便，标记物具有易制备、稳定性好、无污染环境等优点，在临床上得到了广泛的应用，逐渐代替了放射免疫分析。用于肽类激素、甲状腺激素、类固醇激素、药物、NK细胞、蛋白质类、酶等成分的测定。

某些激素在体内代谢产生的代谢产物量与激素分泌量成比例。通过测定尿中这些代谢产物的排出量可推断激素在血中的水平。测定一日尿中碘排出量可了解体内是否缺碘。测定与胰岛素同时释放的产物——C肽的血中水平可反映胰岛素水平，C肽的半衰期比胰岛素长。因此，已用胰岛素治疗患者的胰岛β细胞的功能可通过测定C肽水平了解。应注意的是，某些激素代谢产物受食物和药物的影响，可使结果为假阳性或假阴性，因此在测定前应排除这些因素的影响。

三、激素及其代谢物测定注意事项

免疫分析法是目前临床检测激素的主要方法，除受方法技术本身影响外，激素测定结果受多种因素干扰，因此，在激素的临床检测时应予以考虑。

（一）取样时间

许多激素分泌存在生理性昼夜节律并且随生长发育阶段不同而改变，性激素在不同的发育阶段及月经周期的不同时相差别较大。因此取样时间应根据所处的昼夜节律、发育阶段及月经周期时相，具体分析确定。对呈脉冲性分泌的激素GH，最好应采取多个标本进行测定，取其均值。

（二）取样状态

采取血液标本时应注意避免应激情况，如饥饿、紧张、兴奋、活动、失眠、疼痛等。GH、泌乳素（PRL）、ACTH、皮质醇及儿茶酚胺等均是应激激素，即患者在安静状态和应激反应时分泌量差异悬殊。如，当患者仅由卧位变为立位时，肾上腺素和去甲肾上腺素血浆浓度可能增加一倍以上。所以，供激素测定的血样，一般宜在空腹安静平卧状态，置入保留式取血导管0.5小时以上采集。

（三）避免食物、药物干扰

应避免食物和药物成分对激素测定的结果的影响。如咖啡、香草、柑橘、西红柿、香蕉、巧克力等会影响尿中儿茶酚胺代谢物的测定；对中枢神经系统有作用的药物可影响PRL的分泌；用肾上腺皮质激素或雌二醇治疗可影响甲状腺激素或雄激素的测定；严重酗酒可暂时使血浆皮质醇水平升高，睾酮水平降低。

（四）样本采集后应及时处理

血样采集后应迅速低温分离血浆，必要时可加入肽酶抑制剂或抗氧化剂。生长激素（GH）能迅速被血液中的肽酶水解，肾上腺素和去甲肾上腺素能迅速被氧化破坏。另外，促肾上腺皮质激素（ACTH）易被玻璃器皿吸附，从血样采集到分析都应避免接触。

（五）确保试剂盒质量

激素免疫法检测根据标记物的性质、检测方法不同，有多种试剂盒可供选用，但对检测结果影响最大的是所用抗体的质量。同一样本用抗体质量不同的试剂盒检测，将有较大差异，这也是有关激素参考值各医疗机构报告差别大，较难统一的主要原因。因此，最好能坚持使用质量可靠的同一种试剂盒，并建立以该试剂盒测定的参考值。

用核素标记测定激素的试剂盒应一次性用完，并注意核素的半衰期，超过核素半衰期的试剂盒（使测定结果偏低）不能应用。

（刘健　刘丽达） e54AGBG+cNL9UVxuXVad7EgQswQpLRt9QmF08dJGGjX2XaiToUvoIMPrxvLe+iFF