（一）心肌细胞形态

在400倍放大视野内，心肌细胞呈现融合性成簇存在，胞体呈多边形、星形，个别心肌细胞呈梭形或肌束形等。多数情况下，三个以上心肌细胞聚在一起，呈节律性跳动，个别心肌细胞单独存在，呈跳动状。跳动频率为10～45次/min，主要以10～27次/min为主（图3-1）。

（二）心肌细胞免疫荧光及纯度鉴定

1. 心肌细胞免疫荧光鉴定

原代培养大鼠心肌细胞的细胞核免疫荧光染色结果显示，视野内所有细胞核染色呈蓝色（图3-2）。原代培养大鼠心肌细胞的细胞质免疫荧光染色结果则显示，显微视野内红色颗粒为TRITC标记的肌动蛋白染色（图3-3）。原代培养大鼠心肌细胞的细胞核与细胞质染色合成图结果显示，显微视野内细胞核周围出现红色颗粒的为心肌细胞，蓝色的细胞核周围没有红色阳性颗粒，则为心肌成纤维细胞（图3-4）。

2. 心肌细胞纯度鉴定

由表3-1可知，离体培养大鼠原代心肌细胞数量占总细胞数量的平均百分比为94%，符合试验要求。

（三）不同BRDU浓度对成纤维细胞及心肌细胞的影响

1. 不同浓度BRDU对成纤维细胞的影响

0.05mol/L BRDU组细胞稀疏，细胞间隙过大，对照孔中成纤维细胞多呈梭形、纺锤形，密集分布，零星间杂心肌细胞；0.1mol/L BRDU组细胞稀疏，间隙较宽，间杂跳动心肌细胞，对照孔中成纤维细胞多呈梭形、纺锤形，密集分布，零星间杂心肌细胞；0.2mol/L BRDU组细胞较0.1mol/L BRDU组稀疏，细胞间隙大，存在的少量细胞应为心肌细胞，培养液中漂浮有死亡细胞，对照孔中成纤维细胞多呈梭形、纺锤形，密集分布，零星间杂心肌细胞；0.3mol/L BRDU组细胞较0.2mol/L BRDU组稀疏，培养液中漂浮有大量的死亡细胞，对照孔中成纤维细胞多呈梭形、纺锤形，密集分布，零星间杂心肌细胞；0.4mol/L BRDU组细胞稀疏，培养液中漂浮有大量的死细胞，对照孔中成纤维细胞多呈梭形、纺锤形，密集分布，零星间杂心肌细胞；0.5mol/L BRDU组心肌细胞稀疏，间杂跳动心肌细胞，对照孔中成纤维细胞多呈梭形、纺锤形，密集分布。

2. 不同浓度BRDU对心肌细胞的影响

0.05mol/L BRDU组细胞呈80%～90%分布，60%～70%的细胞在跳动，基本上为融合跳动，有的10～12个细胞聚在一起，跳动29次/min，有的跳动20次/min，有的跳动22次/min；0.1mol/L BRDU组细胞呈80%分布，60%的细胞跳动，1个视野内有15～20个跳动点（区域），起跳频率不完全一致，单个心肌细胞的跳动频率为18～32次/min，聚集成片的心肌细胞的跳动频率为9～12次/min；0.2mol/L BRDU组心肌细胞呈70%～80%分布，有的视野中未见跳动，有的视野中可见较多心肌细胞跳动，跳动频率为12～15次/min；0.3mol/L BRDU组心肌细胞呈80%～90%分布，80%的心肌细胞在跳动，但是跳动的频率不完全一致，呈“此起彼伏”的特点。单个心肌细胞的跳动频率为41次/min，10～15个细胞聚集成片的跳动达45次/min，而有的5～8个心肌细胞聚集成片的跳动频率为15次/min；0.4mol/L BRDU组心肌细胞呈65%～75%分布，细胞形状不清晰，跳动频率为10～22次/min；0.5mol/L BRDU组心肌细胞呈65%分布，跳动较多，细胞分散，跳动频率为7～35次/min，有的细胞3～4个一片，有的6～7个呈一片，有的8～10个呈一片。

（四）不同差速贴壁时间对心肌细胞的影响

1. 不同差速贴壁时间对成纤维细胞的影响

40min差速贴壁组：BRDU阴性组细胞100%融合，密集分布，未见跳动细胞；BRDU阳性组，细胞约60%铺板。

50min差速贴壁组：BRDU阴性组细胞100%融合，密集分布，未见跳动细胞；BRDU阳性组，细胞约60%铺板。

60min差速贴壁组：BRDU阴性组细胞100%融合，密集分布，未见跳动细胞；BRDU阳性组，细胞80%～90%铺板。

70min差速贴壁组：BRDU阴性组细胞100%融合，密集分布，未见跳动细胞；BRDU阳性组，细胞80%～90%铺板。

80min差速贴壁组：BRDU阴性组细胞100%融合，密集分布，未见跳动细胞；BRDU阳性组，细胞约100%铺板，个别细胞跳动。

90min差速贴壁组：BRDU阴性组细胞100%融合，密集分布，未见跳动细胞；BRDU阳性组，细胞约100%铺板，个别细胞跳动。

2. 不同差速贴壁时间对心肌细胞的影响

40min差速贴壁组：心肌细胞约90%分布，30%～40%的心肌细胞跳动，跳动频率为8～47次/min，单个心肌细胞最高跳动47次/min，而10～15个聚集成片的跳动8次/min。

50min差速贴壁组：心肌细胞65%～70%分布，心肌细胞跳动较少，跳动频率为5～50次/min，单个心肌细胞最高跳动5次/min，而5～9个聚集成片的跳动5次/min。

60min差速贴壁组：心肌细胞约90%分布，40%的心肌细胞跳动，起跳时间不一致，跳动频率为11～16次/min，单个心肌细胞最高跳动16次/min，最低11次/min。

70min差速贴壁组：心肌细胞约70%分布，心肌细胞跳动较少，跳动频率为4～5次/min。

80min差速贴壁组：心肌细胞70%～75%分布，20%～30%的心肌细胞跳动，跳动频率为6～9次/min，如3～5个心肌细胞聚集成片的跳动9次/min。

90min差速贴壁组：心肌细胞约80%分布，心肌细胞跳动较少，跳动频率为5～19次/min，如3个心肌细胞聚集成片的跳动5次/min。

（五）不同铺板细胞数对细胞贴壁率的影响

试验结果表明，以2.5×10 ⁶ 个/mL的细胞密度、2mL/孔的量铺入6孔细胞培养板的孔内，视野内心肌细胞呈100%分布。

以（2.2～2.3）×10 ⁶ 个/mL的细胞密度、2mL/孔的量铺入6孔细胞培养板的孔内，视野内心肌细胞呈70%～90%分布。

以2×10 ⁶ 个/mL的细胞密度、2mL/孔的量铺入6孔细胞培养板的孔内，视野内心肌细胞呈50%～60%分布。

（六）心肌细胞与吸光值的关系

从试验结果可以看出，铺板细胞数与相对应的吸光值之间成正比关系，即随着铺板细胞的增多，吸光值逐渐增大（表3-2，图3-5）。在铺板细胞数低于50万个/mL时，其吸光值差异不显著（ P >0.05）；而铺板细胞数大于10万个/mL时，吸光值差异显著，10万个/mL细胞铺设点与25万个/mL铺设点差异不显著（ P >0.05），但是其吸光值显著高于5000个/mL、1万个/mL、2万个/mL、5万个/mL铺设点（ P <0.05），显著低于50万个/mL、100万个/mL、200万个/mL铺设点（ P <0.01）；25万个/mL、50万个/mL、100万个/mL、200万个/mL铺设点之间吸光值差异极显著（ P <0.01），尤其是25万个/mL与100万个/mL两点之间近似一条直线，表明该范围内的铺板数适合后续试验。

（“*”与“**”分别表示 P 值在0.05和0.01水平上的差异显著和极显著） ze4JWu11wPUfcIr5vAghvlpYIl8dUR6gNGdplT5APm8c9oj/aVTAjdpOgsbU8SDe