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1495～1498年，壁画，460 cm×880 cm
意大利米兰圣玛利亚修道院餐厅
《最后的晚餐》
这幅画是从《新约圣经》里来的，犹太教的祭司长想要抓走耶稣，但苦于没人带路；犹大贪图钱财，偷偷跑去向祭司长告密，拿到30个银币后，两人就商量怎样抓耶稣。逾越节那天，耶稣跟12个门徒坐在一起，吃最后一次晚餐，这时候耶稣已经知道犹大的阴谋了，他很伤心，对大家说：“我实实在在告诉你们，你们中有一个人出卖我了！”12个门徒听到以后，反应各异。这幅《最后的晚餐》画的就是这个时刻。
是的，画在米兰圣玛利亚修道院餐厅的墙壁上，这幅画非常大，长有8.8米，宽有4.6米，占了整面墙。达·芬奇画得很用心，特意根据餐厅的建筑结构来画，所以我们看这幅画的时候，会感觉回到了耶稣和十二门徒就餐的场景中。
当时，有许多画家都画过这个场景，在他们的画中，犹大总是自己待在一边，不和大家坐在一起，大家一眼就能发现谁是犹大。达·芬奇改变了这种画法，他希望画出每个人的心理活动，于是，他让耶稣和十二门徒都一起坐着，面对着我们一字排开，通过仔细描绘每个人的表情动作，来表现他们的性格和心理。
这样我们可以把所有人的表情和动作都看得清清楚楚。达·芬奇用几何分割的方法，让耶稣坐在正中，十二门徒分为4组，对称地坐在耶稣的两旁。耶稣把手摊开，表达自己的无奈。每个门徒都对耶稣的话作出了符合自己个性的反应：有的非常惊讶，似乎快晕过去了；有的在旁边讨论坏人到底是谁；有的向耶稣表达自己的忠诚；还有的很愤怒，不敢相信这是事实……整个场面陷于不安之中，像一出舞台剧。
这和文艺复兴以前的绘画传统有关，它严格要求在宗教题材的绘画中，人物的手都要在桌子上面。虽然文艺复兴时期更加开放，束缚更少，但在达·芬奇创作这幅画的时候，这个传统还是有很大影响，所以《最后的晚餐》中的二十六只手，没有一只是“垂在桌面下的”。
达·芬奇是一个发明家，他把油彩和蛋彩混合在一起，发明了一种新颜料，这幅画就是用这种颜料画的，和当时的画家普遍使用的湿壁画颜料不一样。不过因为这种颜料混合了鸡蛋和牛奶等有机物，达·芬奇又将颜料涂抹得很薄，所以完工后50年左右，由于湿气的作用，这幅画开始严重剥落，修道院不得不多次修补。
是的，追求逼真的效果是达·芬奇创作的出发点。达·芬奇采用了线性透视法，将耶稣的右太阳穴作为中心点。如果把这幅画中的窗户、天花板等线都延长，那么都会集中在这个点上，据说当时达·芬奇为了追求精确性，还在这个点上打了一个小孔。用透视法创作，可以使得观众的视平线和画中的视平线一致，让人感觉身临其境。
画中左起第五个就是犹大，他做贼心虚，手握钱袋，身体向后回缩，不小心打翻了旁边的盐盘。他神色慌张，和坐在中间镇定自若的耶稣形成了鲜明的对比。