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路易斯小学毕业之后，进入了阿尔布瓦的中学，如同小学一样，他在阿尔布瓦中学也没能取得很好的成绩。不过，路易斯做什么都认认真真，而且求知欲强。任何事情，如果没有彻底了解，他绝不会贸然进行，路易斯具备深思熟虑的性格。
除此之外，路易斯还有着火一般的热情和超凡的想象力。他的这种想象力体现在绘画方面，绘出了很多不错的作品。
路易斯的中学校长罗马纳先生觉察到了他的这种与众不同的心性。
罗马纳先生是第一个看出路易斯才能的人，也是对路易斯·巴斯德的一生产生很大影响的人。由于罗马纳先生的谆谆教导，路易斯在年少时期就立下了远大的志向。
一天，罗马纳先生和路易斯在校园中散步，他突然问路易斯：“你以后想做什么呢？”
路易斯顿了一下，说：“对不起，我还没考虑好。”
“还有一年你就毕业了，毕业之后怎么办呢？我看你还是继续深造吧！”
“是。”
“那你想去哪个学校呢？”
“这……我还没想好。”
“不如这样，你可以去巴黎的高等师范学校……”罗马纳先生和路易斯聊起了关于巴黎高等师范学校的事情。
当时，法国有两所名声很大的学校——高等师范学校与高等理工科学校。高等师范学校分为文科和理科，毕业之后能够成为中学老师，也有许多人成了大学教授、政府官员或文学家等。高等理工科学校是培养技师的学校，不过这里也造就了很多科学家。法国的伟人大都毕业于这两所学校。这两所学校都是公立的，不必缴纳学费。
少年时期的巴斯德
还有一个大问题，那就是读书的费用。虽然因为父亲辛勤劳动，现在比过去宽裕了，但是拿不出多余的钱送儿子远赴巴黎读书。
路易斯的眼中透出希望的光芒，他听着罗马纳先生谈论关于高等师范学校的事情，觉得自己应该听从罗马纳先生的忠告，所以他下定决心就读高等师范学校。
不过，路易斯的父亲听说路易斯的志愿后，迟迟下不了决心。他想起自己还没有满15岁的儿子要去300千米远的巴黎读书，为他感到担心。
这下子可怎么办呢？父亲仍然犹豫不决，这时候有人提醒他说：“如果是担心费用的问题，那么大可不必，巴黎拉丁区的学生街，有本地出生的巴尔贝先生经营的学舍。听说这位巴尔贝先生对于同乡的寄宿费用向来会特别优待，你的儿子一定也可以享受优待的。”路易斯的好朋友韦塞尔也打算一起去巴黎读书，这样路易斯父亲的担心减轻了不少，他最后答应了路易斯的巴黎之行。
1838年10月底，路易斯出发前往巴黎。那一天，父亲和母亲到驿站前的广场送他，在那寒风细雨的日子，路易斯和韦塞尔乘上公共马车离开了家乡。
那时的旅行很不方便，他们要在马车内坐24小时才能抵达巴黎。父母对路易斯还是不太放心，他们含着眼泪忧心忡忡地与儿子分别。
马车终于起动了，阿尔布瓦镇逐渐远去，当教会的钟楼消逝在遥远的尽头之时，路易斯感到有一种孤独无依的心情。
往常开朗活泼的韦塞尔，似乎也有同感，两个人默默无语，蜷缩在马车的一角，脑海中浮现的是刚刚别离的父母。
来到巴黎之后，路易斯寄宿在巴黎巴尔贝先生的学舍，每天到圣路易斯中学上学。
他们来到了盼望已久的巴黎读书，但总是耐不住寂寞，恨不得能插翅飞回去，因为他们总是挂念着远方的父母。
虽然一再地自我勉励，路易斯还是很怀念阿尔布瓦。他思乡心切，以致夜不成眠。
开朗的韦塞尔就不一样了，他离开阿尔布瓦时，虽也难免悲伤，但到了巴黎，他那份思乡的情结已经风吹云散了。
巴尔贝先生见到路易斯的样子十分担心，他用了各种办法想让路易斯开心起来，但是都不见效。
巴尔贝先生很惊讶路易斯的思乡病竟然有这么严重，他想如果让他继续留在巴黎的话，也许真的会生病，所以他秘密写信通知路易斯的父亲。
就这样，路易斯被父亲带回了阿尔布瓦，他再次进入了镇里的中学。
离开家乡远赴巴黎，现在又放弃愿望返回阿尔布瓦，这让路易斯很后悔。也许当时他对于患了思乡病的自己感到十分失望。
为了能够摆脱这种情绪，路易斯又开始重拾他的绘画，他画了父母、姐妹们和镇内许多居民的肖像。这些肖像画到现在还保存着，竟然看不出那是出自一个少年的手笔。
那时候，法国的中学一般都是7年制，最后一学年分为哲学科和数学科两科，但是阿尔布瓦的中学没这两个学科，也就是说只有6学年。路易斯第六学年的成绩不错，还得到了很多奖品。
校长罗马纳先生十分高兴，向路易斯道喜，随后他说：“这一次你的成绩真是不错。让你继续留在这个小镇有些可惜！我一直都相信，只要你用功，将来一定能够成为有影响力的大人物。我一直希望你进入高等师范学校就读，你现在是否已经不想去高等师范学校了？”
“不，无论怎么样我还是要去，我还没有放弃这个梦想。”
“你这么说我就宽心了。好好地努力，去实现自己的梦想！”
罗马纳先生再次鼓励，让路易斯重新燃起了进入高等师范学校的希望。可是怎么样准备升学考试呢？想起了一年前的事，路易斯实在没有自信。
路易斯沉思了一会儿，说：“罗马纳先生，为了准备考试，我想念布山松的中学。听说那个学校有哲学科，也有数学科……”
“这个计划很不错。布山松距离这里才48千米。你的父母每个月都要到那里去卖皮革，可以经常见面，再也不会像在巴黎时患思乡病了，这个主意想得很好。”罗马纳先生微笑着表示赞成。
路易斯的父母也很赞成他的这个建议，所以路易斯决定去往布山松读书。
布山松镇比阿尔布瓦大，而且也特别热闹。学校位于法院的旁边，是一座石造的古老建筑。
路易斯到了这所学校后开始拼命用功读书，偶尔也提笔画画，虽然获得了朋友们的夸奖，但是路易斯并不因此感到高兴，因为他的心思现在不在画画上面了。
到了布山松没多久，路易斯在给父母和姐妹们的信中说：
我画的肖像，受到了大家的夸奖。但是，肖像画画得再好再多，也没有办法进入高等师范学校。与其绘画被称赞得天花乱坠，我不如拿到第一名的学习成绩。
爸爸，这个星期我们就可以见面了吧？因为星期一开市，为了卖皮革，我想您得早一天来啊。您来了的话，我们可以一起去拜访多纳先生，请教一些有关高等师范学校的事，听说他是高等师范学校毕业的。
路易斯在布山松虽然也想家，但他现在却能够排除念家的情结，加倍努力用功。
1840年的8月，路易斯通过了大学入学资格考试。路易斯的学习成绩，除了科学为优等外，总体成绩并不突出。但即便是这样，布山松中学的校长却对他说：“路易斯同学，新学期的10月起，我们决定让你当助教，好吗？”
“让我当……”路易斯惊讶地问，“校长，请问这是为什么？”
“咱们学校的学生人数太多，但是老师人数太少，人手不够，所以想请你当助教。”
“但是校长，我的成绩不是很好，比我强的人有很多啊。”
“就像你说的，成绩比你好的人确实有很多。但是，成绩好的人不一定能成为好老师。教育工作，单单学习成绩好是不行的，人要实在、认真、热心才是最重要的。而你具有这些优点，所以推荐你当助教，请接受吧。”
路易斯为这突如其来的喜讯激动不已，他欣然接受了。
从新学期的10月起担任助教的路易斯，为了准备高等师范学校的入学考试，他经常埋首于数学科的研读，到了自习时间，他就认真指导学生的课业。校长确实有知人之明，路易斯由于秉性认真，学生都尊重他，很乐意听从他的教导。
路易斯每个月可以领到助教津贴。当路易斯第一次拿到薪水的时候，他觉得金额有些多，认为与当时的身份不相称，而且学校还提供三餐和宿舍。
现在，有了更多时间用来钻研难题，难题也得以逐一解决而减少了。
在这段时间里，路易斯仍然给父母和姐妹不断写信。有一次，他写信勉励妹妹说：“妹妹，我从父亲那里听说你们会主动地用功读书，真是太好了。一个人要能立志向学，才会成功。意志、读书和成功这三项是很重要的。因为意志，通向成功的门才可以打开。如果你的决心坚定的话，那么你的事业可说是已在开展了，请再努力前进吧！只要努力，定能结出成功的果实。”
路易斯在信里反复强调意志坚强的重要性。远赴巴黎读书时候患思乡病的经历，让路易斯深深体会到了坚强意志的重要性。路易斯认为，只要意志坚强，那么生活就可以如你所愿，所以努力强化意志力是很重要的。路易斯已经不再患思乡病，他现在变得情绪稳定、意志坚强。
这时，路易斯感觉他应该对家人表示一点自己的心意，因为姐弟四人，只有他能够如愿读书，总觉得愧疚，所以路易斯觉得也该让姐妹们多多接受教育才好。
当时除了学校的薪金以外，路易斯也受托辅导低年级同学的功课，所以他的收入增加了一些，他准备让妹妹约瑟芬进入女校。曾经有很多同学都请他辅导课业，他为了多留下一点时间以便进修，都婉言拒绝了，现在他为了妹妹，很乐意牺牲自己的部分时间。
路易斯把这个想法告诉了父母。父亲立刻回信说：“你有这番心意，我们也很高兴，但是我们不希望你这么做。你关心妹妹的意愿我们都能够了解，不过准备高等师范学校入学考试也耽误不得，如果你需要钱，我们会马上寄给你。”
路易斯·巴斯德确实是很为父母和姐妹着想的。他不仅对家人如此，对朋友也很关心，很尊重友情。路易斯有一个名叫夏尔·夏布伊的好友，也就是后来的图尔农大学校长，他俩一生的友谊，被传为美谈。
路易斯是布山松中学的数学科学生，夏布伊是哲学科学生。虽然学习的科目不同，但他们却成了最好的朋友。
夏布伊被修习理科但对文学有兴趣的路易斯的性格所吸引，心生敬爱；路易斯认为思想淳朴的夏布伊是值得信赖的朋友，景仰不已。两个人经常推心置腹，畅谈人生理想。
夏布伊为了准备高等师范学校的入学考试打算去往巴黎。路易斯本来也想一起去，但是父亲没有同意，因为父亲怕他像上次一样患思乡病。
“我已经完全没有那时候的孩子气了，不要担心我会患思乡病。”路易斯虽然感到很遗憾，但他还是听从了父亲的决意。
夏布伊独自前往巴黎，这对路易斯来说，有些怅然若失。
留在布山松的路易斯，不断努力学习，成绩总是名列前茅。当他取得物理科的第一名的时候，他想他应该尽早去巴黎，加入更刻苦用功的巴黎学生群中读书。
路易斯一心想着去往巴黎，因为他一个在巴黎读书的朋友以第一名的成绩考进了高等师范学校，但布山松的毕业生却一个也没录取，其中有几个人的成绩比路易斯还要优秀。
路易斯一直在考虑一个问题，巴黎的那两所著名学校到底该去哪一所呢？路易斯突然有一种两所学校都去试一试的想法。布山松中学的老师们也认为这样或许会更好一点，都不断鼓励他。
路易斯立刻给夏布伊写信，征求他的意见。信中说：
我想今年同时考高等师范学校和理工科学校，这种决定到底如何我不清楚。我的想法到底是对还是错呢？也许我们两个要分别进入不同的学校，想到这里，我又认为自己不会去考理工科学校了。请尽快回信，把你的意见说给我听听。
回信马上来了，信中充分显示出夏布伊的爱心和理智：
好好想想自己的兴趣，你不仅要考虑现在，也要考虑将来，最关键的是你做的决定，是要决定自己的命运。
或许，进入理工科学校会前途无量，但是我只想进入高等师范学校，准备过平静的教师生活。那种生活，也许在某一方面来说很单调，但是对于懂得其中乐趣的人而言，却充满了魅力。你之前不是也热爱这种生活的吗？当你和我约定携手同进的时候，我选择了教师生涯。
我认为，你应当坚持你认为幸福的方向。这种说法，或许你的父亲不会同意，他会认为我是诱惑你的恶魔。本来我打算请你在这次休假中来我家玩，现在却要劝你来巴黎了。你的父亲虽然总是不让你为所欲为，但是请不要忘记，他是出自一片爱心……
当路易斯看完信之后，马上决定放弃考理工科学校的想法。
“对，我的梦想从一开始就是高等师范学校，不能再想其他的了。”路易斯全力准备高等师范学校的入学考试。
1842年8月，路易斯考取了高等师范学校，在22人中排第十四名，成绩很不理想。
如果凭着优秀的成绩入学的话，以后会有很多好处。当时法国的考试制度十分严格，考试成绩总是跟着人一辈子，并影响以后的职业生涯，所以路易斯决定重考。
同年10月，路易斯和夏布伊同赴巴黎读书，寄宿在巴尔贝先生的学舍。这一次，父亲终于同意了。
因为现在路易斯已经不是以前的小孩子了，他是以辅导教师的身份进入巴尔贝学舍。寄宿费只有普通学生的1/3，不过要在早上6—7点，辅导年轻的学生复习初等数学。
路易斯每天早上必须提前起床，等到一小时的复习辅导结束之后，他再到圣路易斯中学上学。
路易斯在学舍内总是热心帮忙，十分勤快，后来他的寄宿费用全部被免除。不过，后来的一些零散的费用也要不少钱，路易斯不敢浪费一分钱，他不去游玩，也从来不搞奢侈，他认为有书读就很满足。
父亲来信总是千叮咛万嘱咐，让他每星期天、星期四和夏布伊去饭馆吃一些好的饭菜，但路易斯他们一向很节俭，很少点贵的饭菜。冬天学舍的寝室里很冷，于是路易斯租了一个廉价火炉，和室友们摊钱买柴御寒。
因为书桌上有小洞和裂痕，这样书写很不方便，路易斯只得忍痛花钱买了一张新桌布，而这是路易斯购买的唯一的奢侈品。
第二年的8月，经过了长期的努力，路易斯最终以第四名的优异成绩考上了高等师范学校。
路易斯返回阿尔布瓦的家中，亲自把这个好消息告诉正在紧张等待的父母。路易斯在高等师范学校还没有开学前就回到了巴黎，经过允许，他提前寄宿在高等师范学校的宿舍。他去拜访巴尔贝先生，鞠躬道谢说：“尊敬的巴尔贝先生，蒙受您长期以来的关照，我现在顺利地进入高等师范学校，万分感激。 高等师范学校每星期四只有半天课，下午1—8点之间可以自由外出。我想每周四来这里教寄宿生物理课，报答您的恩德。”
“谢谢你，路易斯，我很乐意接受。”
路易斯将这件事告诉了父亲，父亲回信说：
我听说你现在在巴尔贝先生处辅导学生功课，这件事让我感到很欣慰。巴尔贝先生曾经对你细心照顾，我也正在考虑该怎么样去回报。路易斯，你这么做是很正确的。知恩图报，这是做人的本分。你对巴尔贝先生给你的恩惠有所报答的话，巴尔贝先生将会把曾经施与你的亲切关照，也施与其他年轻人，这会让更多的人受惠。
看完这封信就知道，巴斯德父子是那种绝不会忘记别人滴水之恩的人，并且他们每时每刻都在想着如何回以更多的报答。