实验三 注射剂的制备

一、目的与要求

(1)掌握无菌与灭菌制剂生产工艺中的关键操作。

(2)掌握液体注射剂生产的工艺过程和操作要点。

(3)熟悉注射剂质量检查标准和方法。

二、基础知识与实验原理

注射剂又称针剂，是将药物制成供注入体内的无菌制剂。注射剂按分散体系可分为四类，即溶液型注射剂、混悬型注射剂、乳剂型注射剂、注射用无菌粉末(无菌分装及冷冻干燥)。根据医疗上的需要，注射剂的给药途径可分为静脉注射、脊椎腔注射、肌肉注射、皮下注射和皮内注射。

由于注射剂直接注入人体内部，吸收快，作用迅速，为保证用药的安全性和有效性，必须对成品生产和成品质量进行严格控制。生产灭菌制剂的厂房设施必须根据《药品生产质量管理规范》(GMP)的原则设置，厂房必须按生产工艺和产品质量的要求划分洁净级别。洁净厂房内空气的尘粒数和活微生物数应符合规定。

注射剂洁净厂房的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应。生产车间及各岗位操作区，均应按生产和洁净级别的要求进行清洁、消毒。在洁净级别高的操作区(如配液、过滤、灌封)，生产前按规范要求进行清洁消毒，室内四壁及地面可用消毒清洁剂擦拭，再用紫外灯照射1～2 h。

注射剂的质量要求：无菌、无热原、澄明度合格，应无毒性和刺激性；稳定性合格，即在储存期内稳定有效。注射剂的pH值应接近体液，一般控制在4～9范围内；含量合格；凡大量静脉注射或滴注的输液，应调节吸收压与血浆吸收压相等或接近；凡在水溶液中不稳定的药物，常制成注射用灭菌粉末(即粉针，制备方法有冷冻干燥法、灭菌溶剂结晶法、喷雾干燥法等)，以保证注射剂在储存期内稳定、安全、有效。

为了达到上述质量要求，在注射剂制备过程中，除了生产操作区洁净度要求合格，操作者严格遵守清洁规程外，药物及辅料溶剂等均需符合药用或注射用质量规定，其制备方法必须严格遵守拟定的产品生产工艺过程，并按本产品的质量标准控制产品质量。

注射剂的生产工艺流程如图2·2所示。

三、仪器与材料

(1)仪器：安瓿，垂熔玻璃漏斗，注射器，乳胶管，微孔滤膜，pH计，镊子，加热套，熔封灯，高压蒸汽灭菌机，无菌操作台等。

(2)材料：维生素C，碳酸氢钠，EDTA-2Na，焦亚硫酸钠，注射用水，高纯氮，氢氧化钠，盐酸等。

四、实验内容

1.维生素C注射液的制备

1)处方

维生素C 5.2 g

碳酸氢钠 2.4 g

EDTA-2Na 0.005 g

焦亚硫酸钠 0.2 g

注射用水 加至200 mL

2)实验方法

(1)空安瓿的处理

空安瓿在用前先用去离子水冲刷外壁，然后向安瓿中灌入去离子水甩洗二次(如果安瓿清洁度差，须用0.5%醋酸或盐酸溶液灌满，100℃加热30 min)，再用蒸馏水甩洗两次，最后用澄明度合格的注射用水洗一次，将洗净的安瓿倒置于烧杯中，于120～140℃烘干，备用。

(2)注射液的配制

①容器处理：配制用的一切容器，均需清洗保证洁净，避免引入杂质。

②滤器等的处理:(a)垂熔玻璃漏斗：先用水冲，沥干后用洗液[1%～2%(质量分数)硝酸钠硫酸洗液]浸泡处理，用水冲净，最后用注射用水过滤至滤出水(检查pH 值)不显酸性，并检查澄明度至合格为止。(b)微孔滤膜：常用的是由醋酸、硝酸纤维素混合酯组成的微孔滤膜。经检查合格的微孔滤膜(孔径0.22 m 可用于除菌滤过，孔径0.45 m 可用于一般滤过)浸泡于注射用水中1h，煮沸5min，如此反复3次，或用80℃注射用水温浸4h以上，室温则需浸泡12h，使滤膜中纤维充分膨胀，增加滤膜韧性。使用时用镊子取出滤膜且使毛面向上，平放在滤器的支撑网上，注意滤膜不能被皱褶或刺破，装好后应完整无缝隙，无泄漏现象，用注射用水过滤，滤出水澄明度合格，即可将滤器盖好备用。(c)乳胶管：先用水揉洗，再用0.5%～1%(质量分数)氢氧化钠溶液适量，煮沸30min，洗去碱水;0.5%～1%(质量分数)盐酸水溶液适量，煮沸30 min，蒸馏水洗至中性，再用注射用水煮沸即可。

③惰性气体处理：因本品极易氧化，故配制时需通惰性气体，常用的是二氧化碳或氮气。现在生产常用的高纯氮，可不需处理，或仅分别通过50%甘油、注射用水洗气瓶即可使用。

(3)配液

按处方取配制量80%的注射用水，通入氮气(约2～30 min)使其饱和，加入EDTA-2Na溶解，加维生素C使溶，分次缓慢地加入碳酸氢钠，并不断搅拌至无气泡产生，待完全溶解后，加焦亚硫酸钠溶解，使用碳酸氢钠调节药液pH为5.8～6.2，最后加用氮气饱和的注射用水至足量。用G3垂熔漏斗预滤，再用0.45 m孔径的微孔滤膜精滤，检查滤液澄明度合格后，即可灌封。

(4)灌封

①灌注器的处理：首先要检查灌注器玻璃活塞是否严密不漏水，用洗液浸泡再抽洗灌装器(用蒸馏水冲洗)至不显酸性，最后用注射用水抽洗至流出水澄明度检查合格，即可灌装药液备用。

②装量调节：在灌装前先调节灌注器装量，按药典规定适当增加装量，以保证注射液用量不少于标示量，如表2·2。

(3)熔封灯调节：熔封时要求火焰细而有力，燃烧完全。单焰灯在黄蓝两层火焰交界处温度最高；双焰灯的两火焰应有一定夹角，火焰交点处温度最高。

(4)灌封操作：将过滤合格的药液，立即灌装于2 mL安瓿中，通入氮气于安瓿上部空间，随灌随封。灌装要求装量准确，药液不沾安瓿颈壁，以免在熔封时产生焦头。熔封时可将安瓿颈部放于火焰温度最高处，掌握好安瓿在火焰中停留时间，及时熔封。熔封后的安瓿顶部应圆滑、无尖头或鼓泡等现象。

(5)灭菌与检漏

灌封好的安瓿应及时灭菌，可用100℃流通蒸气灭菌15 min。灭菌完毕后立即检漏，将安瓿放入1%亚甲蓝或曙红溶液中，挑出药液被染色的安瓿。将合格安瓿外表面用水洗净、烘干，供质量检查用。

3)操作注意

(1)配液时注意将碳酸氢钠加入维生素C溶液中的速度应缓慢，以防产生的气泡使溶液溢出，同时要不断搅拌。

(2)维生素C容易氧化变质使含量下降，颜色变黄，尤其当金属离子存在时变化更快。故在处方中加入抗氧化剂并通入氮气，所有容器、工具、管道不得露铁、铜等金属。

(3)掌握好灭菌温度和时间，灭菌完毕立即检漏冷却，避免安瓿因受热时间延长而影响药液的稳定性，同时注意避光。

4)质量检查与评定

(1)pH值 应为5.0～7.0。

(2)颜色 取本品，用水稀释制成每1 mL中含维生素C 50 mg的溶液，采用紫外可见分光光度法，在420 nm的波长处测定，吸光度不得超过0.06。

(3)草酸 取本品，用水稀释制成每1 mL中含维生素C 50 mg的溶液，精密量取5 mL，加稀醋酸1 mL与氯化钙试液0.5 mL，摇匀，放置1 h，作为供试品溶液；精密称取草酸75 mg，置500 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，加稀醋酸1 mL与氯化钙溶液0.5 mL，摇匀，放置1 h，作为对照液。供试品溶液产生的混浊不得浓于对照溶液(质量分数为0.3%)。

(4)细菌内毒素

每1 mL维生素C中含内毒素量应小于0.020 EU。

(5)其他 应符合注射剂项下有关的各项规定。

2.影响维生素C注射液稳定性的因素考察

1)维生素C注射液的处方

维生素C 10 g

无水碳酸钠 3.1 g

注射用水 加至200 mL

2)实验方法

(1)将注射用水煮沸，放冷后备用。

(2)用约20 mL注射用水将无水碳酸钠溶解。

(3)容器内放入占总体积约75%的注射用水，加入维生素C，搅拌使溶解。将碳酸钠溶液缓慢加至维生素C溶液中，调节pH至5.8～6.2，最后加注射用水至处方规定量。

(4)用3号垂熔玻璃漏斗过滤上述溶液，逐个分装于50 mL的三角烧瓶内。

(5)按下表所述，在上述三角烧瓶内进行实验操作，用注射器将各组溶液灌装于2 mL安瓿内，要求每瓶的装量一致，灌装后立即熔封。

将分装好的安瓿置水中煮沸30 min灭菌，灭菌后立即置冷水中，剔除漏气者。

五、结果与讨论

(1)维生素C注射液记录澄明度检查结果，可列表如表2·3。

(2)煮沸灭菌30 min后，观察各维生素C溶液的色泽变化。

(3)将实验结果填入表2·4，说明维生素C的稳定性与哪些因素有关。

试述制备稳定的维生素C注射液应采取哪些措施，并拟定处方及制备工艺。

六、思考题

(1)影响注射剂澄明度的因素有哪些?

(2)维生素C注射剂可能产生的质量问题是什么?

(3)注射剂的质量检查有哪些内容? dzPipFURWlPm6Zjg6T5soLR9hiLa/cdhiFt8mtZyvtfp3TY3GmL7uhp07lwnV6Y4